Virusinių infekcijų serodiagnostika, vartojamos reakcijos.

Simptomai

Daugumoje virusinių infekcijų išsivysto imuninės reakcijos, kurios naudojamos diagnozei. Ląstelių reakcijos paprastai vertinamos limfocitų citotoksiškumo tyrimuose su infekcinėmis medžiagomis arba užkrėstomis tikslinėmis ląstelėmis arba jie nustato limfocitų gebėjimą reaguoti į įvairius AH ir mitogenus.

Praktinėse laboratorijose retai nustatomas ląstelių reakcijų sunkumas. Antivirusinio AT atpažinimo metodai rastų didesnį pasiskirstymą.

PH pagrįstas citopatogeninio poveikio slopinimu po sumaišymo viruso su specifiniu AT. Nežinomas virusas sumaišomas su žinomu komerciniu antiserumu ir, atitinkamai inkubuojant, įvedamas į ląstelių monolitą. Ląstelių mirties nebuvimas rodo neatitikimą tarp infekcinio agento ir žinomo AT.

Rtga hemagliutinacijos slopinimas naudojami virusams, kurie gali agliutinti įvairias raudonąsias kraujo kūnelius. Norėdami tai padaryti, sumaišykite kultūros terpę, turinti patogeno, žinomą komercinę antiserą ir prisidėti prie ląstelių kultūros. Po inkubacijos nustatomas kultūros gebėjimas nustatyti hemagliutinaciją ir, jei jo nėra, daroma išvada, kad virusas neatitinka antiserumo. Citopatinio poveikio slopinimas dėl virusų įsiterpimo. Reakcija, susijusi su citopatinio poveikio slopinimu dėl virusų įsikišimo, naudojama identifikuoti patogeną, kuris slopina žinomą citopatogeninį virusą jautrių ląstelių kultūroje. Norėdami tai padaryti, komercinis serumas (pvz., Raudonukės virusas, jei įtariamas) yra įvežamas į kultūros terpę, kurioje yra tiriamas virusas, inkubuojama ir antroji kultūra yra užsikrėtusi; Po 1-2 dienų į jį įvedamas žinomas citopatogeninis virusas (pvz., Bet koks ECHO virusas). Esant citopatogeniniam poveikiui, daroma išvada, kad pirmoji kultūra užsikrėtė virusu, atitinkančiu taikytą AT.

Tarp kitų tyrimų nustatyta, kad dažniausiai pasireiškia tiesioginė imunofluorescencija (greičiausia, jautri ir atkuriama). Pavyzdžiui, CMV atpažinimas citopatogeniniu poveikiu reikalauja mažiausiai 2-3 savaites, o naudojant paženklintą monokloninę AT, identifikavimas yra įmanomas po 24 valandų. Su tokiais reagentais galima įvežti į virusus užkrėstose kultūrose, inkubuoti, plauti nekontaktinį reagentą ir tirti su naudojant fluorescencinę mikroskopiją (leidžia nustatyti infekuotų ląstelių fluorescencijos buvimą).

Imunoelektroninė mikroskopija (ankstesnio metodo analogas) leidžia nustatyti skirtingus virusų tipus, identifikuotus elektronine mikroskopija (pavyzdžiui, skirtingų tipų herpeso virusais), kurių neįmanoma padaryti, remiantis morfologinėmis savybėmis. Identifikacijai naudojami vietoj imunizacijos, įvairiais būdais ženklinami AT, tačiau metodo sudėtingumas ir didelės sąnaudos riboja jo naudojimą.

Antivirusinių antikūnų (AT) nustatymas serume. Rtga. RSK. RIF.

Immunosorbciniai metodai antivirusinių antikūnų aptikimui.

Paprastesnis ir labiau prieinamas būdas yra antivirusinių antikūnų (AT) nustatymas serume. Kraujo mėginiai turi būti vartojami du kartus: iškart po klinikinių požymių atsiradimo ir po 2

3 savaites. Labai svarbu tiksliai ištirti du serumo mėginius. Vienkartinio tyrimo rezultatai negali būti laikomi galutiniais, nes negalima susieti AT su šia byla. Gali būti, kad šie AT kraujuoja po ankstesnės infekcijos. Esant tokiai situacijai sunku pervertinti serumo tyrimo, atlikto atkūrimo laikotarpiu, vaidmenį. Pirmojo ėminio ėminio ėmimo laikotarpiu ligos buvimą rodo mažiausiai keturis kartus padidėjęs AT titeris, nustatytas atliekant antrojo ėminio tyrimą.

Šie metodai neleidžia diferencijuoti antikūnų (AT), kurie susidaro ligos metu ir cirkuliuoja po atsigavimo (šio laikotarpio trukmė kintama įvairios infekcijos atveju). Kadangi adekvačios diagnozės nustatymui būtina patvirtinti, kad AT titrai padidėja dviem mėginiais, pirmasis mėginys yra tiriamas ūminėje fazėje, o antras - atsistatymo laikotarpiu (po 2-3 savaičių). Gauti rezultatai yra retrospektyvūs ir tinkamesni epidemiologiniams tyrimams. RTGA aptinka AT, sintezuotą prieš hemagliutinino virusus (pvz., Gripo virusą).

Šis metodas leidžia lengvai identifikuoti tokius antikūnus (AT) paciento serume. RVK yra pagrindinis virusinių infekcijų serodiagnostikos metodas (tarp turimų). Reakcija nustato komplementą rišančius IgM ir IgG, tačiau nediferencijuoja; siekiant optimizuoti gautus rezultatus, reakcijos formulavimui reikia tam tikrų personalo įgūdžių.

RIF. Jei galima gauti infekuotų audinių biopsiją ir su komercijos su fluoresceinu pažymėtais AT rinkiniais galimybę, tiesioginis imunofluorescencinis tyrimas gali patvirtinti diagnozę.

Reakcijos formulavimas apima bandomojo audinio inkubavimą su AT, jų tolesnį pašalinimą ir mėginio luminescencinę mikroskopiją. Immunosorbcijos metodai antivirusinių antikūnų aptikimui. Immunosorbcijos metodai (pvz., ELISA ir RIA) yra labiau informatyvūs, nes atskleidžia IgM ir IgG atskirai, o tai leidžia daryti tam tikras išvadas apie infekcinio proceso dinamiką arba būklę išgydyti. Norėdami aptikti AT, žinomi AG yra sorbuoti ant kieto substrato (pavyzdžiui, ant mėgintuvių sienelių, plastikinių mikroplenelių, "Petri" indų) ir skirtingi paciento serumo skiedimai. Po tinkamo inkubavimo pašalinamos nesusietos AT, žmogaus Ig virintojai papildo žmogaus fermentu pažymėtą antiserumą, pasikartojančios AT inkubavimo ir plovimo procedūrą kartojama ir pridedamas bet koks chromogeninis substratas (jautrus fermento veikimui). Kadangi spalvos pasikeitimas yra proporcingas specifinio AT turinio atžvilgiu, tai yra visiškai įmanoma nustatyti spektrofotometrinį jų titrą. ŽIV infekcijos diagnozė yra labiausiai paplitęs imunoblotingo metodas.

Virusinių antigenų nustatymas (AH). ELISA. Šiuo metu jau pasirodė komerciniai rinkiniai, siekiant nustatyti kai kurių patogenų AH, todėl juos galima nustatyti per 5-10 minučių. Norėdami nustatyti hipertenziją kietoje fazėje, absorbuokite žinomą AT ir pridėkite serumą, turinčią hipertenziją; po inkubavimo, nesusijusi AG dekantuoja, sistema yra išplaunama ir ženklinama AT, kurie būdingi sorbuoti AT. Pakartojama inkubavimo ir plovimo procedūra, įvedamas chromogeninis substratas, teigiamas rezultatas užregistruojamas, kai keičiasi sistemos spalva. DNR hibridizacija yra labai specifinis metodas, leidžiantis identifikuoti virusą po hibridizacijos komplementariomis DNR molekulėmis. Fermentai ir izotopai naudojami kaip žymekliai.

Šis metodas nustato viruso DNR gebėjimą hibridizuotis su paženklinta komplementarine DNR; metodo specifiškumas yra tiesiogiai proporcingas papildomos grandinės ilgiui. In situ nukleorūgščių hibridizacijos metodas yra perspektyvus. Reakcijos formulavimui žymimos DNR taikomos audinių biopsijoms (įskaitant tuos, kurie nustatomi formalinu arba įterpami į parafino blokus), o sąveika su papildomais DNR yra registruojama. Šis metodas naudojamas herpes simplex virusams, žmogaus papilomai, Epstein-Barr ir kitiems nustatyti.

PCR. Šis metodas žymiai padidina hibridizacijos metodo jautrumą, padidina viruso DNR kiekį paciento gaunamaje medžiagoje, taip pat pagreitina rezultato gavimo laiką.

Virusinių infekcijų serodiagnostika

RPG - atliekamas Agar gelio plokštelių šuliniuose Petri lėkštelėse. Be to, gelis turėtų būti labai skaidrus ir paruoštas agaro Difco pagrindu. Paprastai jame yra keturios skylės, kurios yra simetriškai priešingos viena kitai. Viena iš jų yra užpildyta diagnostiniu ir normaliu serumu, o kita - žinoma ir išbandyta viruso suspensija. Sklaidantis į agarą, diagnostiniai antikūnai serume ir abu virusai sudaro storį su teigiamais RPG imuniniais kompleksais, kuriuos po 24-48 valandų esant termostatui vizualiai galima aptikti kaip balkštus juostus ar kritulių lankus ant sienos tarp jų.

Rnga - dedamas su eritrocitų antikūnų diagnostikos priemonėmis. Neigiamos reakcijos atveju eritrocitai spontaniškai agliutinuoja mažo disko ("mygtuko") formos šulinių apačioje.

Virusinių infekcijų serodiagnostika

Virusinių ligų serodiagnostika yra tai, kaip jie diagnozuojami, kai pacientų kraujyje yra didelis viruso specifinių antikūnų titras. Jiems taikant, jie atsižvelgia į tai, kad antikūnai prieš virusus gaminami lėtai, tačiau ilgą laiką ir labai dažnai antikūnų susidarymas nesibaigia net po išgydymo. Šiuo atžvilgiu tiriama antikūnų titras augimo dinamika, dėl kurios serologinės reakcijos atliekamos su serumais, iš kurių viena imama virusinės infekcijos viduryje, tarkim, praėjus 5-7 dienoms po gimdymo, o kita - po 2-3-4 savaičių, kai antikūnų titras vaikams natūraliai padidėja dvigubai, o suaugusiems - 4 kartus.

Remiantis šia metodika, serodiagnozė yra ne mažesnė negu tikslumas serotipas, jis yra paprastesnis technikos požiūriu, tačiau viruso infekcijos pobūdis su jo pagalba dažniausiai nustatomas po ligos. Nepaisant to, gydytojo retrospektyvinė (vėlyva) diagnozė yra labai vertinga tais atvejais, kai dėl virusinės infekcijos atsiranda komplikacijų, o epidemiologas rengia kovos su epidemija priemones, kurios užkerta kelią infekcijos plitimui. Serodiagnozės metu kaip antigenas yra naudojamos virusinės diagnostikos, virusinės kultūros suspensijos ir net pacientų, kuriems yra virusinių antigenų, regeneravimas serumas, ir tai atliekama naudojant viruso serotipą naudojamas reakcijas.

Viršutinių kvėpavimo takų ir plaučių veikia Pneumocystis carinii, Legionella pneumophila, citomegalo, herpes simplex virusas, Epstein-Barr virusas, papovavirus, grybai Aspergillus ir kriptokokų, netipinių mikobakterijų (paprastai sukelia Mycobacterium avium intracellulare), Toxoplasma ir kai kirminų rūšių ir žarnyną - sąlyginai Candida genties patogeniniai grybai ir parazitiniai nematodai Strongyloides stercoralis.

Virusinių infekcijų diagnozavimo metodai

PRAKTINĖ SESIJA

Tema: "Virusinių infekcijų mikrobiologinės diagnozės metodai. Virusinės infekcijos prevencija "

Studentas turėtų žinoti:

-morfologija, ekologija, virusų fiziologija, jų tyrimo metodai;

-virusinių infekcijų epidemiologijos pagrindai (infekcijų rūšys);

-chemoterapijos ir virusinės infekcijos chemoprofilaktikos pagrindai;

-imuniteto veiksniai virusinėse infekcijose.

Studentas turėtų sugebėti:

-vykdyti virusinių infekcijų prevenciją;

-parengti veiksmų algoritmus epidemijos kontekste.

Klausimai priekinei diskusijai:

1. Pateikite virusų sampratą. Apibūdinkite viruso dalelių struktūrą ir gyvenimą.

2. Kokie veiksniai apsaugo žmogaus kūną nuo viruso?

3. Nurodykite vaistų nuo virusų grupę ir veikimo mechanizmą. Pateikite narkotikų pavyzdžių.

4. Pavadinkite infekcijos rūšis, kurią sukelia virusai.

5. Pavadinkite žarnyno, kraujo, kvėpavimo takų virusų infekcijas, odos ir gleivinės infekcijas.

6. Pateikite sąvoką "epidemijos procesas", apibūdinkite infekcijos plitimo struktūrą tarp gyventojų.

7. Pavadinkite veiklą, kuri pašalina epidemijos procesą.

Nepriklausomas studentų darbas:

Įrašykite virusinių infekcijų tyrimo metodų apibrėžimus.

Išskirkite raukšlių (Babesh-Negri veršelis) ląstelinių intarpų atlasą su raku (Guarnieri veršis).

3. Sudarykite kovos su epidemija priemones, skirtas virusinei infekcijai (infekciją nustato mokytojas).

Trumpi teoriniai teiginiai

Įvadas

Dėl virusinių ligų gydymo ir prevencijos galimybių, naudojant antivirusinius vaistus, imunomoduliatorius ir vakcinas su skirtingu veikimo mechanizmu, reikia sparčios ir tikslios laboratorinės diagnostikos. Dėl tam tikrų antivirusinių vaistų siauros specifiškumo reikalinga greita ir labai specifinė infekcinio agento diagnozė. Reikia nustatyti kiekybinius metodus virusų nustatymui, siekiant stebėti antivirusinį gydymą. Be ligos etiologijos nustatymo, organizuojant antiepidemines priemones svarbi laboratorinė diagnostika.

Ankstyvi pirmųjų epideminių infekcijų atvejų diagnozė leidžia laiku imtis kovos su epidemija priemonių - karantino, hospitalizacijos, vakcinacijos ir kt. Programų, skirtų užkrečiamųjų ligų, tokių kaip raupų, šalinimas, parodė, kad laboratorinių diagnostikos vaidmuo padidėja. Labai svarbus vaidmuo tenka kraujo paslaugoms ir akušerinei praktikai diagnozuoti, pvz., Donorų, užsikrėtusių žmogaus imunodeficito virusu (ŽIV), hepatito B virusu (HBV), raudonukės ir citomegalovirusinės infekcijos nustatymu nėščioms moterims, nustatymas.

Virusinių infekcijų diagnozavimo metodai

Siekiant sėkmingai atskirti virusus, klinikinė medžiaga turi būti vartojama atsižvelgiant į siūlomos ligos patogeniškumą ir kuo anksčiau.

Paprastai jie imami:

- kvėpavimo takų infekcijoms - nasopharyngeal plaučiui;

- su enterovirusine infekcija - paraudimas ir išmatos (peo-, enterovirusai);

- su odos ir gleivinės pažeidimais - skrepliais, burbulų turiniu (herpes, vėjaraupiai);

- su eksanthemine infekcija - tepinėliai (tymai, raudonukės);

- su arbovirusine infekcija - krauju, smegenų skysčiu.

1. Greitas (spartieji metodai) - tiesioginis viruso ar jo komponentų (antigenų, NK) aptikimas, tiesiogiai klijinėje medžiagoje įskaičiuoti.

A. Viruso metodas yra mikroskopu aptikti tiriamos medžiagos virusą. Dažniausiai naudojamas elektroninis mikroskopas. Lengva mikroskopija dėl nereikšmingai mažo viruso dydžio praktiškai nenaudojama. Šiuo metodu galima nustatyti NK tipą, viriono dydį, viriono formą, taip pat nustatyti tam tikrų infekcijų paveiktose ląstelėse susidariusius ląstelinius intarpus.

Ii. Virusologinis metodas pagrįstas:

viruso auginimas jautriose biologinėse sistemose (ląstelių kultūros, vištienos embrionai, laboratorinių gyvūnų organizmai), citopatogeninis poveikis biologinei sistemai (1 pav.), identifikavimas slopinant virusų veikimą su atitinkamais antivirusiniais antikūnais (2 pav.).

Pav. 1. Citopatinis virusų poveikis ląstelėms: A-normalus augimas, virusų B-CPD į ląstelę

2 pav. Antivulginių virusų slopinimas

Virusologiniai tyrimai yra viruso "auksinis standartas" ir turėtų būti atliekami specializuotoje virusologijos laboratorijoje. Šiuo metu jis naudojamas praktiškai tik virusinės infekcinės ligos protrūkio sąlygomis.

III. Serologinis metodas - antivirusinių antikūnų (optimaliai - IgM) nustatymas ir (arba) jų titrų padidėjimo dinamikos nustatymas per tam tikrą ligos laikotarpį suporuotuose serumuose. Diagnozuojant svarbu, kad antikūnų titras padidėtų 4 ar daugiau kartų.

Suporuotas serumo metodas:ligos pradžioje surenkame veninį kraują 10 ml, o pabaigoje paruoškite serumą, nustatykite antikūnų kiekį pirmajame ir antrajame serume.

Šiuo atveju antrojo serumo antikūnų titras keturis kartus didėja daugeliu atvejų kaip teigiamos ar šviežiai perneštos infekcijos rodiklis. Tiriant vieną serumą, paimtą ūminėje ligos stadijoje, IgM antikūnų nustatymas, rodantis ūminę infekciją, yra diagnostinė vertė.

Šiuolaikiniai diagnostiniai metodai:

1. NK ištyrus nuolatinius virusus NK, kurie yra klinikinėje medžiagoje, sunku nustatyti ar kitais metodais nenustatyti.

2. Radioizotopinių imuninių tyrimų (RIA) metodas pagrįstas radioaktyviųjų izotopų antikūnų etikete, kuri užtikrino aukštą jautrumą nustatant virusinį antigeną. Metodas buvo plačiai patvirtintas 80-aisiais metais, ypač siekiant nustatyti HBV ir kitų nekultivuojamų virusų žymenis. Šio metodo trūkumai yra būtinybė dirbti su radioaktyviomis medžiagomis ir naudoti brangią įrangą (gama skaitikliai).

3. Imunoterapijos analizė (ELISA). Imuninio tyrimo metodai virusinių antigenų nustatymui iš esmės yra panašūs į laisvosios prekybos zoną, bet yra paremti antikūnų ženklinimu fermentais, o ne dažais. Taip pat naudojamos plačiausiai naudojamos krienų peroksidazės ir šarminės fosfatazės, b-galaktozidazės ir b-laktamazės. Žymėti antikūnai jungiasi prie antigeno, ir toks kompleksas nustatomas pridedant substratą fermentui, su kuriuo antikūnai konjuguojami. Galutinis reakcijos produktas gali būti netirpių nuosėdų pavidalu, o paskui skaičiavimas atliekamas naudojant įprastą šviesos mikroskopą arba tirpaus produkto, kuris dažniausiai yra spalvotas (arba gali fluorescuoti arba liuminescuoti), ir registruojamas instrumentiškai.

Kadangi tirpius antigenus galima išmatuoti ELISA būdu, nepakeitos ląstelės yra nereikalingos, todėl gali būti naudojamos įvairios klinikinės medžiagos.

Kitas svarbus ELISA metodo privalumas yra gebėjimas kiekybiškai įvertinti antigenus, todėl jis gali būti naudojamas klinikiniam ligos eigai įvertinti ir chemoterapijos veiksmingumui įvertinti. ELISA, kaip ir RIF, gali būti naudojamas tiek tiesioginės, tiek netiesioginės versijose.

Kietosios fazės ELISA, suteikiantis tirpių spalvotų reakcijų produktą, nustatė dažniausiai. ELISA gali būti naudojamas tiek antigenui nustatyti (tada antikūnai yra dedami į kietą fazę - polistirolo plokštelės šulinio dugną) ir nustatyti antikūnus (po to antigenai yra dedami į kietą fazę).

4. Immunofluorescencijos (RIF) reakcijos. Šis metodas pagrįstas antikūnų, susietų su dažais, pvz., Fluoresceino izotiocianato, naudojimu. RIF yra plačiai naudojamas virusinių antigenų identifikavimui pacientų medžiagoje ir greitam diagnozavimui.

Praktiškai yra dvi galimybės RIF: tiesioginis ir netiesioginis. Pirmuoju atveju su virusais, kurie yra užkrėstose ląstelėse (tepinėlis, ląstelių kultūra), taikomi žymimi su dažymu antikūnai. Taigi reakcija vyksta vienu žingsniu. Metodo nepatogumai yra tai, kad daugeliui virusų reikia turėti daug konjuguotų specifinių serumų.

Netiesioginio RIF varianto atveju tiriamoje medžiagoje taikomas specifinis serumas, kurio antikūnai susiejami su viruso antigenu medžiagoje, o tada antigrybelinis serumas yra taikomas gyvulio, kuriame buvo gaminamas specifinis imuninis serumas, pvz., Anti-triušio, anti-trocado ir kt., Gama globulinų. Advantage Netiesioginis RIF variantas yra tik vieno tipo pažymėtų antikūnų poreikis.

RIF metodas yra plačiai naudojamas, siekiant greitai iššifruoti ūminių kvėpavimo takų virusinių infekcijų etiologiją, analizuojant viršutinių kvėpavimo takų gleivinės tepinėlių atspaudus. Sėkmingas RIF naudojimas tiesioginiam viruso aptikimui klinikinėje medžiagoje yra įmanomas tik tuo atveju, jei jame yra pakankamai daug užkrėstų ląstelių ir nedidelis mikroorganizmų užteršimas, kuris gali sukelti nespecifinę liuminescenciją.

5. Kiti diagnostikos metodai.

RTGA naudojamas diagnozuoti hemagliutinuojančių virusų sukeltą ligą. Tai pagrįsta paciento serumo susiejimu su antikūnu prie papildomo standartinio viruso. Indikatorius reakcijos yra eritrocitai agliutinavo viruso (formavimo charakteristika "skėtį",), atsižvelgiant į konkrečias antikūnų nesant ir nusėda ant dugno neagglyutinirovannymi jei toks egzistuoja.

RPK yra viena iš tradicinių serologinių reakcijų ir yra naudojama diagnozuoti daug virusinių infekcijų. Reakcijoje dalyvauja dvi sistemos: paciento serumo antikūnai + standartinis virusas ir avių eritrocitai + jų antikūnai, taip pat titruotas komplementas. Kai antikūnai ir virusas atitinka, šis kompleksas susieja avių eritrocitų komplementą ir lizę (teigiama reakcija). Neigiamas CSC papildas prisideda prie raudonųjų kraujo kūnelių lizės. Šio metodo trūkumas yra jo nepakankamai aukštas jautrumas ir sudėtinga reagentų standartizacija.

Atsižvelgiant į RSK ir RTGA svarbą, būtina titruoti poruotus serumus, tai yra, imant ligos pradžioje ir atsigavimo laikotarpiu.

RPGA - eritrocitų (arba polistirolo karoliukų) jautrių virusinių antigenų agliutinacija, esant antikūnams. Bet kokie virusai gali būti sorbuoti ant eritrocitų, nepriklausomai nuo hemagliutinacijos aktyvumo ar jo nebuvimo. Dėl nespecifinių reakcijų buvimo serumai tiriami praskiedus 1:10 ar daugiau.

RNR - eritrocitų, jautrių specifiniais antikūnais, agliutinacija, esant virusų antigenams. Dažniausias ROPHA, gautas nustatant HBs-antigeną pacientams ir kraujo donorams.

Paaiškinimas apie virusinių infekcijų laboratorinės diagnostikos metodus

Bendrosios virusų savybės.

Virusai yra mikroskopinės neakumuliacinės gyvenimo formos, turinčios genetinio parazizmo savybę, turinčios vieno tipo nukleino rūgšties (DNR arba RNR) savybes ir dauginantis jas suskaidžius. Virusai egzistuoja dviem kokybiškai skirtingomis formomis: ekstraląsteliniu - virusu ir intracellular virusu. Žmonių ir gyvūnų virusai, dažniausiai sferinės formos, gali būti reguliariai daugialypės formos. Augalų virusai paprastai būna lazdelės formos, o bakterijų virusai (baktriofagai) dažniausiai būna spermatozoidų formos. Virusų dydžiai svyruoja nuo 20 iki 300 nm.

Priklausomai nuo viruso dydžio, yra suskirstyti į:

1. Mažas - nuo 20 iki 60-70 nm (picornavirusai, arbovirusai, reovirusai).

2. Vidutinis - 80-150 nm (miksovirusas)

3. Didelis - 150 nm ir daugiau (herpes virusai, raupų virusai).

Viruso struktūra ir cheminė sudėtis turi tam tikrų ryšių su dydžiu. Paprasčiausi yra maži virusai, sunkiausi - dideli. Maži virusai susideda tik iš nukleino rūgšties ir baltymų - tai nukleoproteinai ir nukleokapsidai. Kapsidas susideda iš baltymų subvienetų - kapsomerų, kurie yra kompaktiški, su spiralės (miksoviruso) arba kubinės simetrijos (entero, adeno, herpes virusų) formos nukleotidų paviršiumi. Kiekvienas virusas turi tam tikrą skaičių kapsomerų (adeno-252, polio-60, herpes-162 ir tt). Vidutiniai ir dideli virusai, be nukleokapsido, turi išorinį voką, kuriame yra baltymų, riebalų, angliavandenių - suprekapsidų. Ši visa struktūra yra virionas. Viriono sudėtis apima neorganinius jonus.

Virusinių infekcijų laboratorinės diagnostikos metodai.

I. Ekspresinė diagnostika - viruso ar jo antigenų nustatymas bandymo medžiagoje:

1. Veislių intarpų (pasiutligės, herpeso infekcijos, natūralių ir vėjaraupių) ir elementinių kūnų (natūralių raupų) nustatymas naudojant specialius dažymo metodus ir įprastinę šviesos mikroskopiją.

2. REEF, ELISA, RIA, EM, IEM.

3. Viruso nukleino rūgšties aptikimas PCR.

Ii. Virusologinis metodas - viruso išskyrimas iš tiriamos medžiagos ir jo identifikavimas:

1-asis etapas - virusų kaupimasis:

a) ląstelių kultūrose ir audiniuose

b) vištienos ar ančių embrionų

c) jautrios laboratorijos gyvūno organizmas

2 etapas - virusų aptikimas (rodymas):

a) ląstelių kultūroje: aptikus citoplazmo ir intranuklidinius įtraukimus, viruso JRS, spalvos Salk mėginį, DSA ir RSAids.

b) viščiuko embrionui: užpildant plokšteles ant HAO paviršiaus, per amniono skysčio drumstumą, DSA.

c) laboratorijos gyvūnų kūne: dėl klinikinių ir patoanatominių pokyčių audiniuose ir organuose.

3 etapas - virusų identifikavimas:

b) PH, atsižvelgiant į: Salk, RTGads spalvos mėginį, JRS neutralizavimą arba infekcinį viruso aktyvumą.

III. Serologinis metodas (serodiagnozė) - viruso antigenų antikūnų nustatymas paciento serume:

1. RTGA, RSK, IFA, netiesioginis RIF, RIA.

2. PH su gyvomis laboratorijos viruso padermėmis.

Paaiškinimas apie virusinių infekcijų laboratorinės diagnostikos metodus.

I. Ekspresinė diagnostika - viruso ar jo antigenų nustatymas bandymo medžiagoje:

1. Veislių intarpų (pasiutligės, herpeso infekcijos, natūralių ir vėjaraupių) ir elementinių kūnų (natūralių raupų) nustatymas naudojant specialius dažymo metodus ir įprastinę šviesos mikroskopiją.

a) Elementarioji kūnai yra individualūs dideli virionai, kurių dydis yra iki 200 nm ir matomas specialiais spalvinimo metodais (pagal Morozovą, Romanovskį-Giemsą) šviesos mikroskopu: pagrindinėse Pascheno kūno dalys su raupų turiniu po pūslelių ir pustulių.

b) infekuotų su tam tikrais virusais ląstelių, ji yra galima stebėti virusinių intarpų, lokalizuotu citoplazmoje formavimas (veršiuko Babes-Negri į pasiutligės, veršelis Guarnieri ne raupų) arba branduolio (užsikrėsti adenoviruso, herpes viruso). Ne visų virusinių intraląstelinių intarpų pobūdis yra aiškus. Japonijos mokslininkai teigia, kad Babesos-Negrio kūnai pasiutligės yra viruso gamybos vieta, t. Y. elementariųjų dalelių kolonijos. Su herpesu ankstyvoje formavimo stadijoje yra virionų grupių. Įtraukos yra spalvos pagal Romanovsky-Giemsa, Turevich, ir Muromtsev (su pasiutligės).

2. REEF, ELISA, RIA, EM, IEM.

a) EM (elektroninė mikroskopija) - leidžia aptikti patogeną klinikinėje medžiagoje, turinčiam neigiamą kontrastą. Šis metodas reikalauja pakankamai didelės patogenų koncentracijos medžiagoje (10 4 -10 5 dalelių / ml).

b) viruso antigenų nustatymas:

- RIF (naudojant diagnostinius liuminescencinius serumus)

- ELISA (ELISA) yra labai jautrus, greitas metodas, kuris yra techniškai paprastas ir prieinamas. Jis naudojamas greitam hepatito, kvėpavimo takų infekcijų, gastroenterito (rotaviruso infekcijų) diagnozei diagnozuoti. Dažniausiai viruso antigenams aptikti naudojamas sumuštinis ELISA variantas. Jo gamybai naudojama plokščiadugnė polistireno imunologinė plokštelė, kurios šulinėlių dugne yra fiksuojami antikūnai prieš viruso antigenus (pirmieji antikūnai). Į bandymų medžiagą įpilama į mėgintuvėlius, inkubuojama tam tikroje temperatūroje, po to skysčiai plaunami specialiais buferiniais tirpalais. Po plovimo įvedami antikūnai, konjuguotos su fermentu (dažniausiai krienų peroksidaze) ir inkubuojami. Po inkubacijos duobutės buvo dar kartą kruopščiai išplauti ir pripildytas substrato rodiklio mišinio - vandenilio peroksido ir tetramethylbenzidine (TMB) arba orto--fenilendiamino (OPD) - ir inkubuojama kambario temperatūroje, tamsioje vietoje, po to, kai kurių reakcija turi būti sustabdytas stotelė reagento (tirpalas sieros arba druskos rūgštis). Rodiklis (chromogenas) esant aktyviems deguonies radikalams, susidariusiems vandenilio peroksido ir peroksidazės fermentacijos procese, keičia spalvą nuo bespalvio iki mėlyno (TMB) arba geltonai rudos spalvos (CRF). Pasibaigus reakcijai, naudojant TMB, tirpalo spalva pasikeičia geltonai, o naudojant OPD tampa tamsesnė. Reakcija fiksuojama fotokolimometru su vertikalia apšvietimo kryptimi, kai bangos ilgis yra 450 nm, o TMB - 492 nm, o kontroliniai teigiami ir neigiami mėginiai yra CRF.

- RIA (radioimmunoassay) - tai kietos fazės imunologinės analizės tipas, kai vienam iš žinomų komponentų yra radioaktyvus etiketė. Rezultatai skaičiuojami naudojant skaitiklį arba autoradiografiją naudojant rentgeno plėvelę. Siekiant aptikti AH, tiriama medžiaga sumaišoma su konkrečiu serumu, o po tam tikro laiko įvedamas homologinis AH, pažymėtas radioaktyviu izotopu. Šiuo atveju egzistuoja konkurencija tarp tiriamos medžiagos anigeno ir pažymėto antigeno, skirto susieti su konkrečiu serumu. Jei ženklinta hipertenzija išlieka laisva, reakcija laikoma teigiama, nes tirta hipertenzija buvo susijusi su diagnostiniu serumu. Šis imunologinio tyrimo variantas vadinamas konkurencinga.

- IEM (imuninė elektroninė mikroskopija) - skiriasi nuo įprastų EM, prieš tai apdorojus bandymo medžiagą su specifiniais antikūnais, pažymėtais metalo atomu. Toks apdorojimas lemia tai, kad, žiūrėdami elektronų difrakcijos modelį, susidomėję objektai (viruso dalelės) aiškiai atsiranda dėl didesnio elektronų absorbuojančio metalo. Tai leidžia jums identifikuoti patogeną ir tuo pat metu jį identifikuoti.

3. Viruso nukleino rūgšties aptikimas PCR.

Ii. Virusologinis metodas - viruso išskyrimas iš tiriamos medžiagos ir jo identifikavimas:

1-asis etapas - virusų kaupimasis:

- kaupimas ląstelių ir audinių kultūroje

Audinių kultūros pradėjo aktyviai vartoti nuo 50-ųjų, kai praktiškai pradėjo vartoti antibiotikus (bakterinės kiaušidės išnyko), buvo sukurtos sintetinės maistingųjų medžiagų terpės, o pagrindinis veiksnys buvo viruso aptikimas CPD. Nuo 1954 m. Jie pradėjo naudoti vieno sluoksnio audinių kultūrų metodą. Yra 3 audinių kultūrų rūšys:

Pirminiai tripsinizuotos kultūros buvo gautas iš įvairių audinių:.. odos-raumenų žmogaus embrionas audinio, vištiena, pelių, inkstų skirtingų embrionų šviesos nuo triušio akies ragenos ir tt Audinys susmulkinti, gydomi tripsino, be skalda, standartizuotas ląstelių skaičius suspenduotos maistinių medžiagų terpėje su antibiotikais, išpilta į mėgintuvėlius ar buteliukus. Pusiau perduodamos kultūros yra diploidinių ląstelių kultūros, kurios dėl dvigubo chromosomų rinkinio gali išlaikyti 40-50 kanalų už kūno ribų, o po to miršta. Persodintos kultūros egzistuoja už kūno ilgą laiką. Jie yra gauti iš įprastų audinių, nuo piktybinių, embrioninių. Transplantable audinio kultūra eilutės: Hep-2 (piktybinis naviko ląstelės iš žmogaus gerklų) NELA (piktybinių ląstelių nuo vėžio gimdos kaklelio naviko) Detroitas-6 (piktybiniai vėžinių ląstelių iš smegenų), A-1 (žmogaus amnionas ląstelės), MK 2 - nuo beždžionių pumpurų - tik apie 400 rūšių. Ląstelių kultūros reikalauja maistingųjų medžiagų. Labiausiai universalus - 199 terpė, kurioje yra 66 komponentai. Eagle rado 28 esminius komponentus: glutaminas, 12 nepakeičiamų aminorūgščių, 8 komplekso B vitaminai, 6 neorganiniai jonai, angliavandeniai, serumas. Visų aplinkos pagrindas yra druskos sprendimai: Earl, Hanks. pH turėtų būti griežtai apibrėžtas ir pastovus - 7,0-7,4.

- viščiukų auginimas viščiukuose, retesnės ančių, embrionų

Nuo 1930 m. Virusai buvo išskirti embrionais. Privalumai: tai uždara erozija, kurioje nėra mikrofloros ir virusų. Antikūnai nėra embrionai, kaip ir laboratorinių gyvūnų organizme, jie yra ir pigūs. Įvairių amžiaus grupių embrionai (nuo 5-7 dienų iki 11-13 dienų) ir įvairūs infekcijos metodai: amniozė, chorionio-alantoio membranoje - HAO, choriono-alantoio ertmėje, trynų maišelyje.

- viruso kaupimas jautrių laboratorinių gyvūnų kūne

Dažniausiai naudojamos skirtingos amžiaus baltų pelių, beždžionės (tymų virusui). Gyvūnų virusų kaupimuisi galima įvertinti ligos klinikinio paveikslo, patologinių ir histopatologinių organų ir audinių pokyčių etapus.

2 etapas - virusų aptikimas (rodymas):

a) audinių kultūroje:

¨ intraląstelinių intarpų, pagrindinių organų aptikimas (žr.

¨ įvairių virusų CPD aptikimas audinių kultūroje:

Viruso reprodukcijos metu audinių kultūroje įvyksta įvairūs pokyčiai, kurie galiausiai sukelia ląstelių mirtį. Ląstelių raukšlių, branduolių piknozė, jų sukimas, šių pokyčių mažų kamienų susidarymas vyksta enteroviruso infekcijos metu, poliovirusai taip pat suteikia labai greitą CPD. Virusas gali padauginti, o ne sukelti pastebimų ląstelių pokyčių, tada jie pradeda dažyti monosluoksnį su hematoksilinu-eozinu ar kitu histoheminiu metodu ir tiria subtilius branduolių ir citoplazmų pokyčius ir tt

¨ RGAads. - hemadsorbcijos reakcija:

Šis indikacijos metodas naudojamas tik virusams, kurių sudėtyje yra hemagliutininų (HA). Jei raudonieji kraujo ląstelės dedamos į ląstelių kultūrą, užkrėstą HA virusu, jos gali būti adsorbuotos ląstelėse, kurias paveikia virusas. Šis reiškinys pastebėtas erkinio encefalito, gripo, paragripo, tymų, kiaulytės ir kt. Virusams. Reakcija registruojama naudojant šviesos mikroskopiją.

□ DSA - hemagliutinacijos reakcija:

Šis indikacijos metodas naudojamas tik virusams, kurių sudėtyje yra hemagliutininų (HA). HA virusai gali sukelti raudonųjų kraujo kūnelių susiliejimą. Skirtingai nuo heamsadorbcijos, tabletės šulinyje dedama vakcinuoto skysčio (VSG), skirto DSA (kultūros terpė, amniono arba alantoicio skystis ir tt), ir dedama raudonųjų kraujo ląstelių suspensija (vištiena, ėriena, žmogus ir kt.). Esant virusui HA susidaro eritrocitų agliutinacija, ir jie sudaro skėčio formos nuosėdas (OHA teigiamas); jei nėra viruso, iš eritrocitų susidaro nuosėdos mygtukas (DGA neigiamas).

¨ Salk spalvos bandymas:

Lengviausias būdas rodyti virusus ląstelių kultūroje. Jo esmė yra vizualus maistingųjų medžiagų terpės spalvos įvertinimas. Daugelyje audinių kultūros terpių yra indikatorius - fenolio raudona. Neutralioje sterilioje aplinkoje indikatorius yra raudonas. Rūgštingoje aplinkoje fenolio raudona spalva tampa geltona. Gyvybingos ląstelės išleidžia rūgštinius metabolizmo produktus į maistinę terpę, todėl indikatorius jau trečią dieną pakeičia spalvą nuo raudonos iki geltonos spalvos. Kai virusas kaupiamas ląstelių kultūroje, jis sutrikdo ląstelių funkcionavimą, kol jie mirs. Tuo pat metu vėluojama keisti terpės spalvą daugiau nei 6 dienas, o tai leidžia daryti išvadą apie viruso buvimą kultūroje.

b) vištienos embrionuose:

¨ Choriono-alantoic membranos plokštelių formavimas

□ neryškus amniono skystis.

c) Laboratorinio gyvūno kūne:

¨ Klinikinių infekcijos apraiškų vertinimas

¨ Patologinių ir histopatologinių pokyčių vertinimas

3 etapas - virusų identifikavimas:

Viruso nustatymas atliekamas jo arba jo savybių inaktyvavimu naudojant specifinius antivirusinius serumus. Tam reikia paskiepyti skysčius (RTGA, PH, RSK, ELISA) arba infekuotų ląstelių kultūrą (REEF) inkubuojant su diagnostiniais serumais, po kurio:

¨ Pridedama eritrocitų suspensija (vištiena, žmogus, avinas ir kt.). Kai antikūnų nėra eritrocitų agliutinacijos viruso hemagliutininų serumo diagnostikos serume (eritrocitų nuosėdos formuojamos mygtuko forma - RTGA yra teigiamas). Jei serumas netinka šiam virusui, raudonieji kraujo kūneliai agliutinuoja, susidaro nuosėdos formos skėtis.

b) PH pagal:

Soli Salk spalvos bandymas:

jei virusas kontaktuoja su diagnostinio serumo antikūnais, jis negali užkrėsti ir sunaikinti kultūros ląstelių, o tai lemia maistingosios terpės žievės pagausėjimą (pH yra teigiamas). Jei serumas neatitinka šio viruso, jis infekuoja kultūros ląsteles, jie miršta ir maistinių medžiagų terpė išlieka raudona.

jei virusas prisijungia prie diagnostinių serumo antikūnų, jis neturi kultivuotų ląstelių CPD (pH yra teigiamas). Apskaita yra atliekama mikroskopu.

¨ infekcinės viruso veiklos neutralizavimas:

jei virusas prisijungia prie diagnostinių serumo antikūnų, jis neužkrečia infekuotų laboratorinių gyvūnų ligos (PH yra teigiamas).

jei virusas yra kontaktuojamas su diagnostikos serumo antikūnais, jis nesukelia eritrocitų adsorbcijos (fiksacijos) ant ląstelių kultūros paviršiaus (PH yra teigiamas). Apskaita yra atliekama mikroskopu.

Galite naudoti sulaikytą ELISA variantą (žr. Skubią diagnostiką, vietoj tiriamos medžiagos naudojamas tik vakcinuotas skystis).

su virusu užkrėstų ląstelių kultūra gydoma diagnostiniu liuminescuojančiu serumu, o reakcijos rezultatas yra įvertintas fluorescuojančiu mikroskopu. Jei virusas prisijungia prie diagnostinio serumo antikūnų, stebima ląstelių luminescencija (RIF yra teigiamas).

III. Serologinis metodas (serodiagnozė) - viruso antigenų antikūnų nustatymas paciento serume:

Virusinių infekcijų serodiagnostikai, naudojant supainuotus serumus, skirtus kas 10-14 dienų. Diagnostikos reikšmingumas yra ne mažiau kaip 4 kartus didesnis AT titeris.

1. RTGA, RSK, ELISA, netiesioginis REEF (su antiglobulino liuminescuojančiu serumu), RIA su virusų antigenais arba inaktyvuotomis viruso dalelėmis.

2. PH su gyvomis laboratorijos viruso padermėmis, atsižvelgiant į: spalvinį Salk testą, RTGadą, CPD neutralizavimą arba infekcinį viruso aktyvumą.

Serodiagnostika

Serologinė diagnostika, pagrįsta antigenų antikūnų reakcija, gali būti naudojama norint nustatyti ir tuos, ir kitus, ir turi įtakos nustatant virusinės infekcijos etiologiją, net jei neigiami viruso išskyrimo rezultatai.

Serologinės diagnozės sėkmė priklauso nuo reakcijos specifiškumo ir laikinų kraujo paėmimo sąlygų, reikalingų organizmo antikūnams sintetinti.

Daugeliu atvejų naudojamas porinis serumas, vartojamas 2-3 savaites. Manoma, kad teigiama reakcija yra mažiausiai 4 kartų padidėjęs antikūnų titras. Yra žinoma, kad labiausiai specifiniai antikūnai priklauso IgG ir IgM klasėms, kurios yra sintezuojamos skirtingais infekcinio proceso laikais. Šiuo atveju IgM antikūnai priklauso anksčiausiai, o jų nustatymo bandymai yra naudojami ankstyvam diagnozavimui (pakanka ištirti vieną serumą). IgG antikūnai sintezuojami vėliau ir išlieka ilgą laiką.

Virusui įvesti naudojamas PH, grupės specifinei diagnostikai, pavyzdžiui, adenovirusinei infekcijai, naudojama komplementą rišančioji reakcija (CSC). Dažniausiai yra hemagliutinacijos (RSG), RSK, RIF slopinimo reakcija, pasyviosios ir atvirkštinės pasyviosios hemagliutinacijos reakcijos (RPGA, ROPGA) reakcijos, įvairios ELISA galimybės, kurios beveik visur pakeitė RIA, kuris yra lygus jautrumui.

RTGA naudojamas diagnozuoti hemagliutinuojančių virusų sukeltą ligą. Tai pagrįsta paciento serumo susiejimu su antikūnu prie papildomo standartinio viruso. Indikatorius reakcijos yra eritrocitai agliutinavo viruso (formavimo charakteristika "skėtį",), atsižvelgiant į konkrečias antikūnų nesant ir nusėda ant dugno neagglyutinirovannymi jei toks egzistuoja.

RPK yra viena iš tradicinių serologinių reakcijų ir yra naudojama diagnozuoti daug virusinių infekcijų. Reakcijoje dalyvauja dvi sistemos: paciento serumo antikūnai + standartinis virusas ir avių eritrocitai + jų antikūnai, taip pat titruotas komplementas. Kai antikūnai ir virusas atitinka, šis kompleksas susieja avių eritrocitų komplementą ir lizę (teigiama reakcija). Neigiamas CSC papildas prisideda prie raudonųjų kraujo kūnelių lizės. Šio metodo trūkumas yra jo nepakankamai aukštas jautrumas ir sudėtinga reagentų standartizacija.

Atsižvelgiant į RSK ir RTGA svarbą, būtina titruoti poruotus serumus, tai yra, imant ligos pradžioje ir atsigavimo laikotarpiu.

RPGA - eritrocitų (arba polistirolo karoliukų) jautrių virusinių antigenų agliutinacija, esant antikūnams. Bet kokie virusai gali būti sorbuoti ant eritrocitų, nepriklausomai nuo hemagliutinacijos aktyvumo ar jo nebuvimo. Dėl nespecifinių reakcijų buvimo serumai tiriami praskiedus 1:10 ar daugiau.

RNR - eritrocitų, jautrių specifiniais antikūnais, agliutinacija, esant virusų antigenams. Dažniausias ROPHA, gautas nustatant HBs-antigeną pacientams ir kraujo donorams.

IF metodas, taip pat ELISA, naudojamas serumo antikūnams nustatyti. Diagnostiniais tikslais PAV tampa vis svarbesnis ir plačiai paplitęs. Virusinis antigenas yra sorbuojamas kietoje fazėje (polistirolo plokštelės arba polistirolo karoliukų skylių dugniai). Pridedant atitinkamus antikūnus serume, jie yra susirišę su sorbuotais antigenais. Norint gauti antikūnų buvimą aptikta anti-antikūnų (pvz., Žmogaus), konjuguotų su fermentu (peroksidaze). Substrato pridėjimas ir substrato reakcija - fermentas suteikia spalvą. ELISA taip pat gali būti naudojamas antigenams identifikuoti. Šiuo atveju antikūnai adsorbuojami kietoje fazėje.

Monokloniniai antikūnai. Per pastarąjį dešimtmetį, kai buvo sukurta monokloninių antikūnų gamybos sistema, kuriant genų inžinerijos tyrimus, buvo padaryta didelė pažanga nustatant virusines infekcijas. Taigi, smarkiai padidėjo virusinių antigenų nustatymo diagnostikos metodų specifiškumas ir jautrumas. Sunkusis monoklonų, kurie sudaro nedidelę virusinės baltymų dalį, kuri gali nebūti klinikinėje medžiagoje, sėkmingai įveikti, naudojant keletą monokloninių antikūnų prieš įvairius virusų veiksnius.

Infekcinių ligų serodiagnozė.

Imuninės reakcijos yra naudojamos pacientų ir sveikų žmonių diagnostinių ir imunologinių tyrimų metu. Šiuo tikslu naudojami serologiniai metodai, t.y. antikūnų ir antigenų tyrimo metodai, taikant antigenų antikūnų reakcijas, nustatytas kraujo serume ir kituose skysčiuose, taip pat kūno audiniuose.
Antikūnų prieš patogeną antigenų nustatymas paciento serume leidžia nustatyti ligos diagnozę. Serologiniai tyrimai taip pat naudojami mikrobų, įvairių biologiškai aktyvių medžiagų, kraujo grupių, audinių ir naviko antigenų, imuninių kompleksų, ląstelių receptorių ir tt antigenų identifikavimui.
Kai išskiria mikrobą iš paciento, patogenai yra identifikuojami, tiriant jo antigenines savybes naudojant imunologinius diagnostinius serumus, t. Y. Hiperimunizuotų gyvūnų, turinčių specifinių antikūnų, kraujo serumus. Tai yra vadinamasis serologinis mikroorganizmų identifikavimas.
Mikrobiologijoje ir imunologijoje plačiai naudojamos agliutinacijos, kritulių, neutralizavimo reakcijos, reakcijos su komplemento dalyviu, naudojant paženklintus antikūnus ir antigenus (radioimmunologiniai, imunofenaliniai, imunofluorescenciniai metodai). Išvardytos reakcijos skiriasi pagal įregistruotą efektą ir įvedimo būdą, tačiau visi jie yra pagrįsti antigeno sąveikos reakcija su antikūnu ir naudojami antikūnams ir antigenams aptikti. Atsparumo imunitetui būdingas didelis jautrumas ir specifiškumas.
Laboratorijose diagnostinių reakcijų pagrindas yra antikūnų sąveika su antigenu. In vitro reakcija tarp antigeno ir antikūno yra specifinė ir nespecifinė fazė. Konkrečiame faze susidaro greita specifinė antikūno aktyviosios vietos susiejimas su antigeno determinantu. Tuomet prasideda nespecifinė fazė - lėtesnė, kuri pasireiškia matomais fiziniais reiškiniais, tokiais kaip flokuliacija (agliutinacijos fenomenas) arba nuosėdos drumstumo forma. Šiame etape reikalingos tam tikros sąlygos (elektrolitai, optimalus pH).
Antigeno (epitopo) determinanto sujungimas su aktyvaus antikūnų Fab-fragmento centru yra susijęs su van der Valsalo jėgomis, vandenilio ryšiais ir hidrofobine sąveika. Antikūnų junginio antigeno stiprumas ir kiekis priklauso nuo antikūnų afiniteto, avidiškumo ir jų valentingumo.

53. Agliutinacijos reakcija. Komponentai...

RA yra paprastas reakcijos formulavimas, kai antikūnai jungiami prie korpusuliarinių antigenų (bakterijų, eritrocitų ar kitų ląstelių, netirpių dalelių, kurių adsorbuojasi Ag). Tai tęsiasi elektrolitų (fizinis, Rr) buvimas. Naudojami įvairūs RA variantai: išsiskleidžianti, apytikrė, netiesioginė ir tt RA pasireiškia dribsnių ar nuosėdų formavimui (ląstelės, "sujungtos" su antikūnais, turinčiais du ar daugiau antigeną rišančių centrų). RA naudojamas, kad: 1) nustatytų AT pacientų serume, pavyzdžiui, su brucelioze (Wright, Heddelson reakcija), vidurių šiltuoju ir paratifu (Vidal reakcija) ir kt.; 2) paciento izoliuoto patogeno nustatymas; 3) kraujo grupių nustatymas naudojant monokloninius antikūnus prieš eritrocitų alloantigenus. Norėdami nustatyti pacientui suteikti išsamią paciento rojaus atskiesto serumo buvo pridėta Diagnostiką (pakabinimo nužudytų mikrobų) ir po kelių valandų inkubacijos 37? C pažymėti aukščiausią serumo praskiedimas (titras serume), kuriame agliutinacija įvyko. Jei būtina nustatyti iš paciento išskirtą patogeną, apytikslis RA nustatomas naudojant diagnostinį AT (agliutinacijos serumą), t. Y. Sukėlėjas yra serotipiškas. Reakcija atliekama ant stiklinio stiklelio. Į diagnostinio agliutinacijos serumo lašą praskiedus 1:10 arba 1:20 pridedama gryna paciento izoliuoto patogeno kultūra. Prie pastovios kontrolės: vietoj serumo užlašinkite natrio chlorido tirpalo lašą. Kai flokulentiškos nuosėdos pasirodo laše su serumu ir mikrobais, RA į mėgintuvėlius su didėjančiais agliutinuojančio serumo tirpikliais, į kuriuos įpilama 2-3 lašus patogeno suspensijos, ištraukiama. Agliutinacijos metu atsižvelgiama į nuosėdų kiekį ir skysčio skaidymosi laipsnį. Reakcija laikoma teigiama, jei agliutinacija yra pastebima praskiesti arti diagnostinio serumo titerio. Tuo pat metu reikia atsižvelgti į kontrolę: serumas, praskiestas izotoniniu natrio chlorido tirpalu, turi būti skaidrus, mikrobų suspensija toje pačioje tirpale - tolygiai drumstas, be nuosėdų.

54. Reakcijos krituliai.

RP yra tirpiojo molekulinio antigeno komplekso susidarymas ir nusėdimas su antikūniais drumstumo forma - nuosėdos. Jis susidaro sumaišant Ar ir Ab lygiavertėmis sumomis; vieno iš jų perteklius sumažina imuninio komplekso susidarymo lygį.
RP įdėti į mėgintuvėlius (sandūros nuosėdų bandymas), geliai, kultūros žiniasklaidos ir kitų paplitusių rūšių Lenkijos Respublikoje pusiau skysto agaro gelio :. Dvivietis imuninio Ouchterlony radialinės imunodifuzijos, imuno, ir kt.
Mechanizmas. Pateikiama su skaidriu koloidiniu tirpiu Ar ekstraktu iš patologinės medžiagos, aplinkos objektų ar grynų bakterijų kultūrų. Reakcijoje naudojami skaidrūs diagnostiniai nusėdantys serumai su dideliais AT titrais. Paskyrus serumą, jie paima didžiausią Ag skiedimą, kuris, sąveikaujant su imuniniu serumu, sukelia drumstumą.
Skiedinio nuosėdų reakcija nustatoma siauraose mėgintuvėliuose, kuriuose yra 0,2-0,3 ml nusodinto serumo. Tada pipete su Pasteu 0,1-0,2 ml antigeno tirpalo lėtai sluoksnis. Vamzdžiai kruopščiai perkelti į vertikalią padėtį. Reakcijos apskaita per 1-2 minutes. Teigiama reakcija - ant sienos tarp serumo ir bandymo antigeno atsiranda balto žiedo pavidalo nuosėdos. Kontrolinėse mėgintuvėse susidaro nuosėdos.

55. Įkelti serologines reakcijas. Rnga

Reakcijos netiesioginis (pasyvus) hemagliutinacijos (IHA, TPHA), remiantis naudojant raudonųjų kraujo ląstelių (arba latekso), adsorbuotų ant jų paviršiaus arba Ar antikūnų, kurių sąveika su atitinkamais antikūnų arba serume pacientų Ar sukelti klijavimui ir praradimo eritrocitų kompozicijos osadka.Dlya RNGA naudoti avių, arklių, žmonių ir tt eritrocitus, kurie yra paruošti ateityje, apdorojant formalinu arba glutaraldehidu. RNR antigenai gali būti polisacharidas AG, bakterijų vakcinos ekstraktai ir kt. Raudonieji kraujo kūneliai, jautrūs AH - raudonųjų kraujo ląstelių diagnostikai. Jo paruošimui naudojami avino eritrocitai. RNGA naudojamas infekcinių ligų diagnozavimui, gonadotropinio hormono nustatymui šlapime, kai nustatomas nėštumas, padidėjęs jautrumas vaistams, hormonams ir tt. RNGA yra labiau specifiškas nei RA. Jis naudojamas identifikuoti patogeną pagal Ar struktūrą arba parodyti ir identifikuoti toksinus bandymo medžiagoje. Atitinkamai naudojami standartiniai eritrocitų antikūnų diagnostiniai preparatai, gaunami adsorbuojant specifinius antikūnus ant tinino apdorotų eritrocitų paviršiaus. Plastikinių plokštelių šuliniuose paruošiama tiriamoji medžiaga serijos tirpalais. Į kiekvieną duobutę pridedama tokia pat 3% suspensijos su antikūniais pakrauta eritrocitų dalis. Po to, kai 2 h inkubacijos 37 ° C, paverčia sąskaitą, kad svarbu vertinti išvaizdą raudonųjų kraujo kūnelių nuosėdų (Nepurtant) už neigiamą reakcijos nuosėdos rezultatai pasirodė kaip kompaktinių diskų arba žiedu skylučių apačioje su teigiamu reakcijos, - būdingų nėrinių nuosėdos eritrocitų, bauda dantytos plėvelės.

56. Immunofluorescencijos reakcija....

RIF yra specifinio AH aptikimo metodas, naudojant antikūnus, konjuguotus su fluorochromu. Jis turi didelį jautrumą ir specifiškumą.
Jis naudojamas greitam infekcinių ligų diagnozavimui, taip pat antikūnams ir paviršiaus receptoriams bei leukocitų (imunofenotipų) žymenų ir kitų ląstelių nustatymui.
Fluorescencinių serumų paruošimas pagrįstas kai kurių fluorochromų sugebėjimu patekti į cheminius ryšius su baltymų serumu, netrikdant jų imunologinio specifiškumo.
Yra trys metodai: tiesioginiai, netiesioginiai, su papildymu. Tiesioginis RIF metodas grindžiamas faktu, kad fluorescuojančio mikroskopo fluorescuojančio mikroskopo ultravioletinių spindulių šviesoje fluorescromis paženklinti "Ag" audiniai ar mikrobai, gydyti imuniniais serumais su AT, paženklinti fluorochromis. Tokiu liumenizuojančiu serumu paveiktos tepinėlio bakterijos švyti aplink ląstelės periferiją žaliosios sienos forma.
Netiesioginis RIF metodas yra nustatyti Ar-AT kompleksą, naudojant antiglobuliną (prieš antikūnus), serumą, pažymėtą fluorochromu. Norėdami tai padaryti, tepalai iš mikrobų suspensijos yra apdorojami antimikrobinio triušio diagnostinio serumo antikūniais. Tada AT nesusiję antigenai mikrobų yra plaunami, ir liekantys mikrobų ties aptikta perdirbant tepinėlio antiglobulino (anti-triušio) serumas, ant kurio yra liuminoforais. Dėl to susidaro mikrobų + antimikrobinių triušių AT + anti-triušių AT kompleksas, žymėtas fluorochromu. Šis kompleksas stebimas fluorescenciniu mikroskopu, kaip ir tiesioginiu metodu.
Mechanizmas. Ant stiklinio stiklelio tepinėlis gaminamas iš bandomosios medžiagos, pritvirtintas prie liepsnos ir apdorojamas imuno triušių serumu, turinčiu AT prieš Ag patogeną. Ar-AT komplekso susidarymui preparatas dedamas į drėgną kamerą ir 15 minučių inkubuojamas 37 ° C temperatūroje, po to kruopščiai nuplaunamas izotoniniu natrio chlorido tirpalu, kad pašalintų antikūnus, nesusijusius su antigenu. Tada preparatui pridedamas fluorescentinis antiglobulino serumas prieš triušių globulinus, inkubuojamas 15 minučių 37 ° C temperatūroje, po to preparatas kruopščiai nuplaunamas izotoniniu natrio chlorido tirpalu. Dėl fluorescuojančio antiglobulino serumo susiejimo su specifiniu AT, fiksuotu Ag, susidaro šviesos formos Ar-AT kompleksai, kuriuos aptinka fluorescencinė mikroskopija.

57. ELISA. Imunoblotingas

Fermentinis imuninis tyrimas ar Ar nustatymo metodas naudojant atitinkamus antikūnus, konjuguotus su fermento žymėmis (šarminės fosfatazės). Sujungus Ag su fermentu pažymėtu imuniniu serumu, mišiniui pridedamas substratas / chromogenas. Substratas suskaidomas fermentu ir pasikeičia reakcijos produkto spalva - spalvos intensyvumas yra tiesiogiai proporcingas susietų Ag ir Ab molekulių skaičiui. IFA yra naudojamas virusinių, bakterinių ir parazitinių ligų diagnozavimo, visų pirma ŽIV infekcijos, hepatito B, et al diagnozę., Taip pat hormonų, fermentų, narkotikų ir kitų biologiškai aktyvių medžiagų, esančių mažais kiekiais koncentracijos medžiagos nustatymas (10 spalis -10 12 g / l).

Kietosios fazės ELISA yra bandymo variantas, kai vienas iš imuninio atsako komponentų (Ag, AT) yra sorbuojamas kietu nešikliu, pavyzdžiui, polistirolo tablečių šuliniuose. Komponentai nustatomi pridedant paženklintą "Ag" arba "AT". Teigiamas rezultatas keičia chromogeno spalvą. Kiekvieną kartą, pridedant kitą komponentą, nesurišti reagentai yra pašalinami iš šulinių plaunant,
I. Apibūdinant AT, paciento serumas, fermentu pažymėtas antiglobulino serumas ir fermento substratas / chromogenas nuosekliai prideda prie sorbuotų Ar kraujo serumo tablečių.
Ii. Apskaičiuojant Ag į sorbuotų šulinėlių AT, naudojamas Ar (pvz., Kraujo serumas su norimu Ar), prie jo pridedamas diagnostikos serumas ir antriniai antikūnai (prieš diagnostinį serumą), pažymėti fermentu, o po to - fermento substratas / chromogenas. Konkurencinis ELISA tyrimas nustatant Ar: norimas Ar ir paženklintas fermentu Ar konkuruoja tarpusavyje, ribotai serumo antikūnams.
Kitas bandymas yra konkurencinis ELISA nustatymas AT nustatymui: pageidaujami antikūnai ir paženklinti fermentu AT konkuruoja tarpusavyje Ar adsorbuotos kietoje fazėje.
Immunoblotingas yra labai jautrus baltymų aptikimo metodas, pagrįstas elektroforezės ir ELISA arba RIA deriniu. Imunoblotingas naudojamas kaip diagnostikos metodas ŽIV infekcijai ir kt.
Ag patogeną atskiriamas poliakrilamido gelio elektroforeze, po to perkeltas iš gelio į aktyvuotą popierių arba nitroceliuliozės membraną ir sukurtas ELISA metodu. Firmos gamina tokias juostas su antigenų "blot". Šiems juostelėms taikomas serumo pacientas. Tada po inkubacijos pacientas plaunamas iš nesusijungiančių AT, o serumas taikomas žmogaus imunoglobulinams, paženklintiems fermentu. Juostoje esantis kompleksas [Ar + AT pacientui + AT prieš žmogaus Ig] nustatomas pridedant chromogeninį substratą, kuris keičia spalvą fermento veikimu.

58 Neutralios toksinų neutralizavimo reakcija.

AT serumo antikūnai gali neutralizuoti žalingą mikrobų ar jų toksinų poveikį jautrioms ląstelėms ir audiniams, kurie yra susiję su mikrobinių Ag antikūnų blokavimu. PH nustatomas įvedant Ar-AT mišinį gyvūnams arba į jautrius bandymo objektus (ląstelių kultūrą, embrionus). Kadangi gyvūnuose ir tiriant m / o ar jų Ar poveikį darančius daiktus nėra, toksinai rodo imuninį serumą neutralizuojantį poveikį ir, atitinkamai, Ar-AT komplekso sąveikos specifiškumą. Norint atlikti reakciją, tiriama medžiaga, kurioje manoma, kad eksotoksino buvimas sumaišomas su antitoksiniu serumu, laikomas termostatu ir suleidžiamas į gyvūnus (jūrų kiaulytės, pelės). Kontroliuojami gyvūnai įpurškė bandomosios medžiagos filtratą, kuris nebuvo apdorotas serumu. Tuo atveju, jei eksotoksinas neutralizuojamas antitoksiniu serumu, bandomosios grupės gyvūnai išliks gyvi. Kontroliuojami gyvūnai miršta dėl eksotoksino

59. Antitoksinis imunitetas, aktyvus ir pasyvus. Anti-mikrobiniai ir antitoksiniai serumai.

Atsparumas antikūnui - imunitetas nuo toksinų, kuriuos gamina mikroorganizmai, augalai, gyvūnai.

  • Aktyviai įgytas imunitetas vystosi po imunizacijos su susilpnėjusiomis ar nužudytomis mikroorganizmais arba jų antigenais. Abiem atvejais organizmas aktyviai dalyvauja imuniteto sukūrime, reaguodamas į imuninio atsako vystymąsi ir atminties ląstelių kaupimosi formavimąsi.
  • Pasyviai įgytas imunitetas gaunamas įvedus paruoštus antikūnus arba, rečiau, sensibilizuotus limfocitus. Tokiais atvejais imuninė sistema reaguoja pasyviai, nedalyvauja tinkamu imuninio atsako laiku.

Antitoksiniai serumai. Priėmimas, valymas, titravimas.
Antitoksiški heterogeniniai serumai yra gaunami įvairių gyvūnų hiperimunizacija. Jie vadinami heterogeniški. yra serumo baltymų, kurie yra sveiki žmonėms. Pageidautina naudoti homologinius antitoksinius serumus, gautus naudojant sergančius ligonius (tymus, parotidus) arba specialiai imunizuotus donorus (stabligę, anti-botulino), kraujo serumą iš placentos ir netinkamo kraujo, turinčius antikūnų daugeliui infekcinių ligų sukėlėjų ar vakcinų atidėta liga.
Antitoksinių serumų išgrynimui ir koncentracijai naudojami tokie metodai: krituliai šalto alkoholio ar acetono, fermentų apdorojimas, afininė chromatografija, ultrafiltracija.
Imuninės antioksidacijos serumų aktyvumas yra išreiškiamas antitoksiniais vienetais, t.y. mažiausiu antikūnų kiekiu, kuris sukelia reakciją su tam tikru specifinio antigeno kiekiu, kuris matomas arba registruojamas atitinkamu metodu. Antitoksinio stabligės toksoido ir atitinkamo Ig aktyvumas išreiškiamas antitoksiniais vienetais.
Antioksidaciniai serumai vartojami toksinių infekcijų (stabligės, botulizmo, difterijos, dujų gangrenos) gydymui.

Antimikrobiniai serumai turi antikūnų prieš patogeninių ląstelių antigenus. Jie gaunami imunizuojant gyvūnus su atitinkamų patogenų ląstelėmis ir dozuojant mililitrais. Antimikrobiniai serumai gali būti naudojami gydant:
• juodligė;
• maras;
• streptokokinės infekcijos;
• stafilokokinė infekcija;
• Pseudomudulinė infekcija.
Jų tikslas yra nustatomas pagal ligos sunkumą ir, priešingai nei antitoksinis, nėra privalomas.

60 Alergijos koncepcija...

Alergija - padidėjęs organizmo imuninės sistemos jautrumas pakartotinai veikiant alergeną, kurį anksčiau jautė alergenas.

Dėl alergijos mechanizmų tyrimo buvo sukurta nauja klasifikacija Jeil ir Coombs. Atsižvelgiant į tai, yra keturi pagrindiniai alergijos tipai: anafilaksinis (I tipo), citotoksinis (II tipo), imunokompleksas (III tipas) ir ląstelių (IV tipo). Pirmieji trys tipai yra susiję su GNT, ketvirta - su HRT. Pagrindinis vaidmuo GNT pradžioje yra antikūnai (IgE, G ir M), o HRT yra limfinės makrofagų reakcija. I tipo alerginė reakcija yra susijusi su IgE biologiniu poveikiu, vadinamu reaginu, kuris turi afinitetą nuo mastolių ir bazofilų. Šios ląstelės ant paviršiaus palaiko didelį afinitetą IgE rišantį Fc receptorių. Alergeno įjungimas į receptorių kompleksą sukelia bazofilio ir stiebo ląstelių degranuliaciją - granulėse esančių biologiškai aktyvių medžiagų (histamino, heparino ir kt.) Išskyrimas į ekstraląstelinę erdvę. Dėl to išsivysto bronchų spazmas, vazodilatacija, edema ir kiti simptomai, būdingi anafilaksijai. Sukurtos citokinai stimuliuoja ląstelių imunitetą: T2 helpero susidarymą ir eozinofilogenezę. Citotoksiniai antikūnai (IgG, IgM), nukreipti prieš mikroorganizmo somatinių ląstelių paviršių Ag, susiejami su tikslinių ląstelių membranomis ir sukelia įvairias nuo antikūnų priklausomo citotoksiškumo mechanizmus (II tipo alerginė reakcija). Masyvi citolizė kartu su atitinkamomis klinikinėmis apraiškomis. Hemolizinė liga, sukelta Rh konflikto ar kito kraujo perpylimo. Ag-AT kompleksai, kurie po masyvios Ar dozės (alerginės reakcijos III tipo) dozės dideliais kiekiais susidaro paciento organizme, taip pat turi citotoksinį poveikį. Dėl kumuliacinio poveikio III tipo alerginės reakcijos klinikiniai simptomai pasireiškia vėliau, kartais ilgiau kaip 7 dienas. Tačiau tokio pobūdžio reakcija priskiriama GNT. Reakcija gali pasireikšti kaip viena iš komplikacijų, susijusių su heterologinių imuninių serumų vartojimu terapijos ir profilaktikos tikslais ("serumo liga"), taip pat baltymų dulkių ("ūkininko plaučių") įkvėpimu. Alergenai yra antigenai, kurie jautriems žmonėms sukelia alergines reakcijas. Priklausomai nuo kilmės, alergenus galima suskirstyti į keletą grupių: namų ūkis - buitinės ir buitinės dulkės, kreida ir jo tirpalas vandenyje; epidermio - vilnos, nugaros, plunksnų, pleiskanų, išmatų, naminių gyvūnų seilių, žmogaus epidermio; vabzdžiai - sinantropinės erkės, tarakonai, švelnūs ir kraujui skirti vabzdžiai; žiedadulkės - įvairių augalų žiedadulkės; maistas - galbūt bet kuris maisto produktas gali būti alergenas. Ypač pavojingi yra jūros gėrybės, gyvuliniai baltymai, braškės, citrusiniai vaisiai; medicinos; grybelis - pagrindinė namų dulkių sudedamoji dalis, dažnai pelėsiai ir mielių grybai; Helmintas. Be to, alergenai vaizdine prasme vadina alergijos priežastis: šiluma - vėjas, šaltis, šiek tiek šaltas ir bet kokios jo apraiškos; moralinis ir biologinis - nervų suskaidymas, patirtis, baimė, jaudulys.

61. Neatidėliotinas padidėjusio jautrumo. Reakcijos mechanizmai. Atopija. Anafilaksija
Nedelsiant padidėjęs jautrumas (GNT) - padidėjęs jautrumas, kurį sukelia antikūnai (IgE, IgG, IgM) nuo alergenų. Jis išsivysto po kelių minučių ar valandų po alergeno poveikio: plaukioja indai, padidėja jų pralaidumas, niežėjimas, bronchų spazmai, bėrimas, edema. Vėlyvasis GNT etapas papildomas eozinofilų ir neutrofilų produktų poveikiu.
Pagrindiniai padidėjusio jautrumo reakcijų tipai


I tipas - anafilaksinis. Pradinis alergeno įvedimas sukelia plazmos ląstelių IgE, IgG4 gamybą. Sintezinis IgE Fc fragmentas yra pritvirtintas prie bazofilų Fc receptorių kraujo ir masto ląstelėse gleivinėse, jungiamojo audinio. Su alergenų pakartotiniu įleidimu ant masto ląstelių ir bazofilų susidaro IgE kompleksai su alergenu, todėl ląstelių degranuliacija.
Atopijos fone gali atsirasti I tipo padidėjusio jautrumo klinikinių pasireiškimų. Atopija yra paveldima polinkis vystytis GNT dėl padidėjusios IgE antikūnų susidarymo į alergeną, padidėjusį šių antikūnų Fc receptorių skaičių ant stiebo ląstelių, stiebinių ląstelių pasiskirstymo ypatybes ir audinių barjerų pralaidumą.
Anafilaksinis šokas - ūminis, kai susidaro kolapsas, edema, raumenų spazmas; dažnai baigiasi mirtimi. Urtikarija - padidina kraujagyslių pralaidumą, oda tampa raudona, atsiranda blisteriai, niežėjimas. Bronchinė astma - uždegimas, bronchų spazmas, padidėja bronchų gleivių sekrecija.


II tipas - citotoksiškas. Ant ląstelės esantis antigenas yra "atpažįstamas" IgG, IgM klasių antikūnų. Kai sąveikauja ląstelių antigenų antikūnų tipas, komplementas aktyvuojamas ir ląstelė yra sunaikinama trimis kryptimis: nuo komplemento priklausomos citologijos; fagocitozė; nuo antikūnų priklausomas kraujo citotoksiškumas. Reakcijos laikas yra minučių ar valandų.

III tipas - imunokompleksas. IgG, IgM klasių antikūnai formuoja imuninius kompleksus su tirpiais antigenais, kurie aktyvuoja komplementą. Su antigenų pertekliumi ar komplemento trūkumu imuniniai kompleksai yra kaupiami kraujagyslinės sienelės, bazinės membranos, t. Y. Struktūros su Fc receptoriais.
Reakcija gali būti apskritai (pvz, serumo ligos) arba įtraukti atskirus organų ir audinių, įskaitant odos (pvz, sisteminė raudonoji vilkligė, Arthus reakcija), inkstų (pvz, inkstų vilkligė), šviesos (pvz, aspergiliozės), arba kitų organų. Ši reakcija gali būti dėl daugelio mikroorganizmų. Po antigeno poveikio susidaro 3-10 valandų.

62. Transplantacijos imunitetas. Jų struktūra yra suderinama su antigenais.

Transplantacijos imunitetas - padidėjęs kūno imuninės reakcijos būklė, atsiradusi atsakant į organų arba audinių transplantaciją, paimta iš kito genetiškai skirtingo žmogaus

Transplantacijos imuniteto funkcija: užtikrina genetinių svetimų ląstelinių elementų pašalinimą iš organizmo, taip pat savo ląsteles, kurios sintezuoja pašalines medžiagas arba adsorbuoja svetimus antigenus.

Žingsnis transplantacija imunitetas: 1) aptikimas užsienio transplantacijos (įgyvendinami regioninių limfmazgių Susisiekus T-limfocitų su antigenais transplantacijos) 0,2) Skiepai - reprodukcija klonas TTC limfoma (T žudikas) patekti į kraujotaką ir koncentruotas indų ir audinių transplantato.3) Sunaikinimas - mediatorių gamyba

Transplantacijos antigenai, esantys bet kokių branduolių ląstelių paviršiuje, yra griežtai kontroliuojami histocompatijiškumo genų. Žmonėms daugiausiai jų yra limfoidiniame audinyje, blužnyje, limfmazgiuose ir odoje.

Transplantacijos antigenų (HLA) sistema užtikrina biologinę kūno individualumą, imunologinės priežiūros įgyvendinimą, dėl kurio kyla žala, mirtis ir pašalinimas iš antigeninių svetimų ląstelių ir audinių kūno.

Transplantacijos imuniteto reakcijos yra stipresnės, tuo didesnės genetinės skirtumai tarp donoro ir recipiento. T. ir T. vystymasis. veda prie persodinto audinio mirties. Imuniteto būklė transplantacijos metu vyksta daugiausia dėl uždelsto tipo padidėjusio jautrumo. Padidėjęs jautrumas transplantacijai pasireiškia po 1-2 savaičių. po transplantacijos ir išlieka 1 mėn. iki kelerių metų. Imologinė reakcija alogeninių ląstelių transplantacijoje gali turėti priešingą formą ir eiti iš transplantuoto audinio imunokompetentinių ląstelių pusės prieš recipiento organizmą - transplantato prieš šeimininko ligą (GVHD). Ši reakcija dažniausiai pasireiškia kaulų čiulpų transplantacijai, kai recipiento imuninis reaktyvumas sumažėja.

Reikalinga sąlyga T. ir. ir transplantato prieš šeimininką ligos yra tarp paciento kūno ir audinio įskiepyta skirtumai pagal iš histosuderinamumo antigenų, kurie sudaro sudėtingą sistemą žinomų genetinių markerių ir žmogaus kontroliuojama genų, esančių chromosomoje artimas arba tose pačiose srityse. Šie genai lemia imuninio atsako stiprumą, antikūnų gamybą ir ląstelių atsaką. Visų pirma, HLA (žmogaus leukocitų antigenai) sistema, turinti maždaug 120 antigenų, yra suderinamumo antikūnai.

Transplantacijos imuniteto slopinimo metodai:

Atsargiai parinkti donorus

Tolerancijos kūrimas (šiuo metu - eksperimente)

63 Seroprofilaksija ir serotonija. Anafilaksinis šokas ir serumas...

Seroprofilaktika ir serotonija arba pasyvi imunizacija atliekami dviejų tipų serumo preparatų: žmogaus imunoglobulinų (HPA) ir heterologinių serumų, gautų iš hiperimunizuotų gyvūnų. Neatidėliotina profilaktika serumo preparatams atliekama asmenims, kurie nebuvo vakcinuoti nuo atitinkamos infekcijos ir kurie anksčiau nebuvo nukentėję nuo jo kuo anksčiau po galimo infekcijos.
Pagal savo savybes, MHC yra padalintas į 2 grupes - HLM normalus ir specifinis HLM.
Heterogeninių serumų preparatai daugiausia naudojami ekstremalioms toksikozės profilaktikai ir gydymui, taip pat kai kurioms virusinėms ir bakterinėms infekcijoms gydyti.
Be pirmiau minėtų vaistų, yra imuninių serumų, neutralizuojančių gyvatės nuodą (Cusp, Epha, Cobra) ir Karakurt voras.
Anafilaksinio šoko prevencijai prieš įvedant bet kurį arklių serumą būtina atlikti intrakandinį tyrimą su praskiestu 1: 100 arklių serumu.

Anafilaksija yra tiesioginė reakcija, kuri atsiranda, kai AG yra pakartotinai įvedamas reaguodamas į Ag-AT komplekso kenksmingą poveikį ir būdingas stereotipiškai vykstantis klinikinis ir morfologinis vaizdas.
Pagrindinis vaidmuo anafilaksijoje yra IgE, kuris yra susijęs su bazofilais ir stiebo ląstelėmis. Po pirmojo kūno sąlyčio su Ar susidaro IgE, kuris yra adsorbuotas ant minėtų ląstelių paviršiaus. Pakartotinai nurijus tą patį antigeną, IgE prisijungia prie Ar. Atsakant į tai, ląstelės išskiria tarpininkus, histamines ir histamines panašias medžiagas. Šie tarpininkai jungiasi prie receptorių, funkcinės raumenų, sekrecijos, gleivinių ir kitų ląstelių paviršiuje, sukelia atitinkamą reakciją (susitraukimo lygiųjų raumenų bronchų, žarnyno, šlapimo pūslės, padidėjo kraujagyslių pralaidumą ir kitų, funkcines ir morfologinės pakeitimus, kurie yra susiję su klinikiniais pasireiškimo). Klinikoje - dusulys, dusinimas, silpnumas, nerimas, traukuliai, nevalingas šlapinimasis, defekacija ir kt.

Serumo liga yra reakcija, kuri atsiranda, kai vienas parenteralinis didelio serumo ir kitų baltymų kiekio dozių vartojimas. Paprastai reakcija pasireiškia po 10-15 dienų. Ligos serume mechanizmas yra susijęs su antikūnų susidarymu prieš įvestą užsienio baltymą ir žalingą poveikį Ag-AT kompleksų ląstelėms. Klinikoje serumo liga pasireiškia odos ir gleivinės patinimu, karščiavimu, sąnarių patinimu, bėrimu ir niežėjimu; pasikeičia kraujas (padidėjęs ESR, leukocitozė ir kt.).

Šių ligų prevencija - skiepijimas pagal metodą. Dažnai: pirma, vaistas skiriamas nedidelėje dozėje po 1-1,5 val. Pagrindinės dozės.

64. T priklausomas uždelsto tipo padidėjęs jautrumas.

būdingas tai, kad:
- Trūksta antikūnų kraujyje.
- Reakcijos atsiranda nuo 24 iki 48 valandų (ir vėliau) po antigeno patekimo į jautrinamą organizmą.
- Reakcijos dažnai pasireiškia sąlytyje su alergenu su oda.
- Pasyvus padidėjusio jautrumo perdavimas atliekamas ne su serumu, o su leukocitais, limfinio audinio ląstelėmis.

Nedelsiant padidėjęs jautrumas su imuniteto B-sistema, padidėjusio jautrumo uždelsto tipo sistemai su T-sistema. Atsižvelgiant į alergijos formą, atsiranda vienos ar kitos rūšies padidėjusio jautrumo reakcijų. T priklausomos alerginės reakcijos yra: transplantato atmetimas, vėluojama alergija tirpiems baltymams, keletas auto-alerginių reakcijų, kontaktinis alerginis dermatitas. T-priklausomi alergijos vaidina svarbų vaidmenį padidėjusio jautrumo tuberkuliozės mikrobakterijoms, taip pat kai kurioms kitoms infekcijoms atveju. Susilpnėjusi alerginė reakcija dažniausiai atsiranda dėl T-aktyviųjų ląstelių.

Alerginiai testai - biologinės reakcijos daugelio ligų diagnozei, pagrįstos padidėjusiu organizmo jautrumu dėl alergeno.
Dėl daugelio infekcinių ligų, susijusių su ląstelinio imuniteto aktyvavimu, plečiasi organizmo jautrumas patogenams ir jų metaboliniams produktams. Tai pagrįsta alergijos tyrimais, kuriais diagnozuojamos bakterinės, virusinės, protozoinės infekcijos, mikozės ir helminto infekcijos.
Visi alergijos testai skirstomi į dvi grupes - mėginiai invivo ir invitro.
Pirmoji grupė (in vivo) apima odos tyrimus, atliekamus tiesiogiai pacientui, ir nustato tiesioginę alergiją (po 20 min.) Ir uždelstą (po 24-48 val.) Tipų.
Alerginiai tyrimai pagrįsti jautrumo nustatymu už paciento kūno ribų. Jie naudojami, kai dėl vienos ar kitos priežasties neįmanoma atlikti odos tyrimo arba tais atvejais, kai odos reakcijos duoda neaiškių rezultatų.
Alerginiams tyrimams naudojami alergenai - diagnostiniai produktai, skirti nustatyti konkrečią kūno sensibilizaciją.